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        大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒优质产品

        点击次数:1230 发布时间:2013/9/13
        提 供 商: 上海研盟生物科技有限公司 资料大小:
        图片类型: 下载次数: 53
        资料类型: DOC 浏览次数: 1230
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        大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒优质产品

        实验原理

        本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-水平。用纯化的大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入肌钙蛋白Ⅰ(Tn-再与HRP标记的肌钙蛋白Ⅰ(Tn-抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的肌钙蛋白Ⅰ(Tn-呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-浓度。
        试剂盒组成

        1
        30倍浓缩洗涤液
        20ml×1瓶
        7
        终止液
        6ml×1瓶
        2
        酶标试剂
        6ml×1瓶
        8
        标准品(80μg/L)
        0.5ml×1瓶
        3
        酶标包被板
        12孔×8条
        9
        标准品稀释液
        1.5ml×1瓶
        4
        样品稀释液
        6ml×1瓶
        10
        说明书
        1份
        5
        显色剂A液
        6ml×1瓶
        11
        封板膜
        2张 
        6
        显色剂B液
        6ml×1/瓶
        12
        密封袋
        1个

        标本要求
        1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
        2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
        3.组织处理:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

        大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒优质产品

        操作步骤

        1.         标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

        40μg/L
        5号标准品
        150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
        20μg/L
        4号标准品
        150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
        10μg/L
        3号标准品
        150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
        5μg/L
        2号标准品
        150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
        2.5μg/L
        1号标准品
        150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

        2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
        3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
        4.         配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
        5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
        6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
        7.         温育:操作同3。
        8.         洗涤:操作同5。
        9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
        10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
        11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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